除了核酸检测技术,还有以下方法可以用于 HIV 感染诊断:
一、抗体检测
酶联免疫吸附试验(ELISA):
原理:利用酶标记的抗体与样本中的 HIV 抗体结合,通过检测酶的活性来判断样本中是否存在 HIV 抗体。通常采用双抗原夹心法或间接法进行检测。
步骤:
样本采集:一般采集血液样本。
加样:将样本加入到包被有 HIV 抗原的微孔板中。
孵育:使样本中的抗体与抗原充分结合。
洗涤:去除未结合的物质。
加酶标抗体:加入酶标记的抗人抗体。
孵育和洗涤:再次孵育并洗涤,去除未结合的酶标抗体。
加底物:加入酶的底物,产生颜色变化。
检测:通过酶标仪检测颜色变化的程度,判断样本中是否存在 HIV 抗体。
特点:操作相对简单、成本较低、适合大规模筛查。但存在窗口期,即在感染 HIV 后一段时间内可能检测不出抗体。
快速检测试剂:
原理:与 ELISA 类似,也是通过检测 HIV 抗体来判断是否感染。但采用的检测方法更加简便快捷,通常在几分钟到几十分钟内即可得出结果。
类型:包括胶体金法、免疫层析法等。
步骤:
样本采集:可采集血液、唾液或尿液样本。
加样:将样本滴加到检测试剂上。
等待结果:根据试剂说明书规定的时间等待结果显示。
特点:快速、简便、无需特殊设备,适用于现场检测和自我检测。但准确性相对较低,可能出现假阳性或假阴性结果。
二、抗原检测
p24 抗原检测:
原理:检测样本中的 HIV p24 抗原。在 HIV 感染早期,病毒大量复制,p24 抗原水平升高,可在抗体产生之前被检测到。
步骤:
样本采集:一般采集血液样本。
加样:将样本加入到检测试剂中。
孵育:使样本中的抗原与抗体充分结合。
洗涤:去除未结合的物质。
加酶标抗体:加入酶标记的抗 p24 抗体。
孵育和洗涤:再次孵育并洗涤,去除未结合的酶标抗体。
加底物:加入酶的底物,产生颜色变化。
检测:通过酶标仪检测颜色变化的程度,判断样本中是否存在 p24 抗原。
特点:可在感染早期检测,有助于缩短窗口期。但单独检测抗原的敏感性相对较低,一般与抗体检测联合使用。
三、免疫印迹法(Western blot)
原理:通过电泳将 HIV 蛋白分离,然后将分离后的蛋白转移到膜上,与患者血清中的抗体反应。如果血清中存在 HIV 抗体,则会与膜上的特定 HIV 蛋白结合,形成特异性条带。通过观察条带的出现情况,可以判断患者是否感染 HIV。
步骤:
样本采集:采集血液样本。
蛋白分离:将 HIV 蛋白进行电泳分离。
转膜:将分离后的蛋白转移到膜上。
封闭:用封闭液封闭膜上的非特异性结合位点。
加样:加入患者血清。
孵育:使血清中的抗体与膜上的蛋白充分结合。
洗涤:去除未结合的抗体。
加酶标二抗:加入酶标记的抗人抗体。
孵育和洗涤:再次孵育并洗涤,去除未结合的酶标二抗。
加底物:加入酶的底物,产生颜色变化。
检测:观察膜上的条带出现情况,判断患者是否感染 HIV。
特点:是 HIV 抗体检测的确认试验,具有较高的特异性和准确性。但操作复杂、耗时较长、需要专业人员和设备。